Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

　　其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye），生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

　　实验前准备

　　1.准备96孔板、移液枪及枪头、15ml及50ml离心管等所用耗材，消毒后转移至生物安全柜内。

　　2.用75%酒精擦拭生物安全柜台面2遍，紫外灯消毒30min。

　　3.准备好待铺板细胞，制成细胞悬液，细胞计数。

　　实验步骤

　　1.在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃，5% 二氧化碳的条件下)。

　　2. 向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性，则不需要2-3步骤，直接从第4步操作。

　　3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6，12，24或48小时)。

　　4. 向每孔加入10μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

　　5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

　　6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。