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CCK-8

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  Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

  其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye),生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

  实验前准备

  1.准备96孔板、移液枪及枪头、15ml及50ml离心管等所用耗材,消毒后转移至生物安全柜内。

  2.用75%酒精擦拭生物安全柜台面2遍,紫外灯消毒30min。

  3.准备好待铺板细胞,制成细胞悬液,细胞计数。

  实验步骤

  1.在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时 (在37℃,5% 二氧化碳的条件下)。

  2. 向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。如果测定细胞活性,则不需要2-3步骤,直接从第4步操作。

  3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12,24或48小时)。

  4. 向每孔加入10μl CCK-8溶液 (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

  5. 将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

  6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

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