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Transwell

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描述

  Transwell

  trans- 这个词根有转移、转运、穿过等意思, well 有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性的杯状的装置,根据 Corning 公司的 Transwell 说明书中的介绍,可以认为这是一种膜滤器 ( Membrane filters ),也可认为是一种有通透性的支架( permeable supports )。

  更准确地说, Transwell 应该是一种实验技术,这项技术的主要材料是 Transwell 小室( Transwell chamber , Transwell insert ),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对 Transwell 会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。

  但无论是何种外形,其关键部分都是一致的,那就是杯子底层的一张有通透性的膜 ,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孔径大小有 0.1 - 12.0μm ,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜 ( polycarbonate membrane )。 下图是一个Transwell装置的纵切面

  将 Transwell 小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。

  我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

  应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养 、细胞趋化 、细胞迁移 、细胞侵袭 等多种方面的研究。 当然不同细胞其体积不同,具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验:

  (1). 共培养体系:

  小于 3.0um 孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择 3.0um 以下孔径。常用 0.4 、 3.0um 。我们实验室用的是 0.4um 。将细胞 A 种于上室,细胞 B 种于下室,可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的影响。

  (2). 趋化性实验

  可用 5.0 、 8.0 、 12.0um 膜,上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室,计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。

  ① 细胞 B 对细胞 A 的趋化作用:将细胞 A 种于上室,细胞 B 种于下室,可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的趋化作用。

  ② 趋化因子对细胞的趋化作用:将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。

  (3). 肿瘤细胞迁移 实验

  常用 8.0 、 12.0μm 膜,上室种肿瘤细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。

  (4). 肿瘤细胞侵袭 实验

  常用 8.0 、 12.0μm 膜,原理与肿瘤细胞迁移 实验类似。

  上室种肿瘤细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细胞迁移 实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶 ,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶( MMPs )将基质胶 降解 ,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。

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