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肿瘤实验

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  动物肿瘤实验:诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。

  一、肝癌

  1.二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝癌

  (1)取体重250 g左右的封闭群大白鼠,雌雄不拘;

  (2)按性别分笼饲养。除给普通食物外,饲以致癌物,即用 0.25%DEN水溶液灌胃,剂量为10 mg/kg,每周一次,其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中,任其自由饮用;

  (3)共约4个月可诱发成肝癌;

  (4)也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。

  2.4-2甲基氨基氮苯(DBA)诱发大鼠肝癌

  (1)用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠,饲料中维生素B2 不应超过1.5~2 mg/kg;

  (2)4~6月就有大量的肝癌诱发成功。

  3.2-乙酰氨基酸(2AAF)诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌

  (1)给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料;

  (2)每日每平均2~3 mg 2AAF(也可将2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%动物产生肝肿瘤。

  4.二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌:

  (1)用剂量为每日0.3~14 mg/kg体重,混于饲料或饮水中给予;

  (2)6~9个月后255/300大鼠发生了肝癌。

  5.亚胺基偶氮甲苯(OAAT)诱发小鼠肝癌

  (1)用1%OAAF苯溶液(约0.1 ml含1 mg)涂在动物的两肩胛间皮肤上,隔日一次,每次2~3滴,一般涂100次。

  (2)实验后7~8周即而出现第一个肝肿瘤,7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。

  (3)或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中,给C3H小鼠皮下注射4次,每日间隔10天,也可诱发成肝癌。

  6.黄曲霉素诱发大鼠肝癌

  (1)每日饲料中含0.001~0.015 ppm,混入饲料中喂6个月后,肝癌诱发率达80%。

  二、胃癌

  1.甲基胆蒽诱发小鼠胃癌

  (1)取20 g左右的小鼠,无菌手术下,在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽(MC)线结。

  (2)含MC的线结是用普通细线,在一端打结后,将线结置于盛有MC小玻璃试管内,在酒精灯上微微加温,使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05~0.1 g 20-甲基胆蒽内浸入10~20根线。

  (3)手术埋线后4~8个月可诱发成功胃癌。

  2.不对称亚硝胺诱发小鼠胃癌

  剂量为0.25 ml/kg体重,3个月后全部动物发生前胃乳头状癌,7~8个月后有85~100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之,615系小鼠敏感性最差。

  3.甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌

  给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素,剂量为2 mg/kg体重,每周饮用5次,520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。

  三、食管癌 

  1.甲基苄基亚硝胺(MBNA)诱发大鼠食管癌

  (1)取体重100 g以上的Wistar大鼠;

  (2)任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水,并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75~1.5 mg/kg体重;

  (3)80~100天可诱发成食管癌。

  2.二烃黄樟素(Dihydrosafrole)诱发大鼠食管癌

  (1)二烃黄樟素是一种制备啤酒的调味品,在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万(2500~10000 ppm)黄樟素,就能引起20~75%的食管癌。

  3.甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌

  (1)用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水溶液,给动物经口灌喂,每天一次,大鼠灌注剂量为1 mg/kg体重;

  (2)至第27天即发现一例食管乳头状瘤,154天发现第一例食管癌, 11个月食管癌的发生率为53%。

  四、肺癌

  1.二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肺癌

  (1)小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次,每次剂量56 mg/kg,DEN总剂量达到868 mg;

  (2)观察时间为100天左右时,发癌率可达40%。

  (3)DEN总剂量达到1176 mg,观察时间为半年左右时;发癌率可达94%。

  2.乌拉坦诱发肺腺癌

  (1)小鼠(A系, 1~11/2月龄)较大鼠敏感,每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1~0.3 ml,间隔3~5日再注,共注2~3个月,每只小鼠用量约为 100 mg;

  (2)注后3个月肺腺癌发生率为100%,而且多数为多发性,这种诱发瘤为良性。

  3.苯并芘诱发肺腺癌

  (1)猴气管内注入3,4-苯并芘(苯并花为3~15 mg与等量之Fe2O3混合液),每周一次,共10次;

  (2)6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。

  4.硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌

  (1)用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入;

  (2)13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。

  5.甲基胆蒽诱发肺腺癌

  (1)用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入,每次0.1 ml(含甲基胆蒽 5 mg)每周一次,共6次;

  (2)53周后有62.5%动物发生了肺癌。

  五、鼻咽癌

  1.二甲基胆蒽(MC)诱发大鼠鼻咽癌

  (1)取直径2~3 mm的硬质塑米管,在酒精灯上小火拉成锥形,每段长约3.5 cm,管内填以结晶体MC。

  (2)小管一端用火封闭,以防药物外溢,尖端用针刺数孔,使MC能从小妃溢出。

  (3)取体重120 g左右的大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔,利用前鼻孔较小管粗端为小的特点,稍加用力,迫使小管全部进入鼻腔内,其尖部可达鼻咽腔。不需另加固定,即可使小管长期留于鼻腔内。

  (4)待到预定时间(半年以上),或动物自行死亡时,到其鼻咽部,10%福尔马林固定,脱钙后,石蜡包埋,进行连续切片。发癌率可达60%以上。

  2.二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌

  (1)取120 g左右大白鼠,雌雄均可,乙醚麻醉后,用磨平针尖的8号针头,从前鼻孔轻轻插入,针尖可达鼻咽腔;

  (2)经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次,共15~20次,可诱发成鼻咽癌。

  六、宫颈癌 

  1.二甲基胆蒽(MC)诱发宫颈

  取雌性小白鼠,以附有0.1 mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下,借助于阴道扩张器及磨纯的弯针,将线穿入宫颈。经右宫角背部穿出,使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉,缝合皮肤,挂线以后,同日开始连续注射青霉素2~3天。以防术后感染。至一定时间(半年左右)处死动物,宫颈组织用10%福尔马林固定,石蜡包埋,连续切片。

  七、结肠癌

  1.二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)诱发鼻咽癌

  (1)给四周龄的雄性大白鼠,皮下注射二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)每周一次,连续21周,每次 DMH21 mg/kg;

  (2)最后一次给药后1~4周,处死动物;

  (3)降结肠部位用Bouin液固定,脱水,石蜡包埋,切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液,并加EDTA37 mg,用氢氧化纳(0.1 N)液将pH调至6.5备用。

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