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DNA乙酰化检测

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DNA甲基化检测

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描述

  1.基因组DNA的提取及浓度测定,设计引物时要求所扩增的片段中必须含有一个或一个以上的CpG岛,以保证检测可以正常进行。

  2.基因组DNA进行化学修饰,主要采用亚硫酸氢钠修饰,注意温度和时问的掌握,修饰后的DNA单链比较脆弱,操作应轻柔,避免剧烈振荡。适当增加亚硫酸氢钠的浓度,同时适当减少基因组DNA的量可防止假阳性的出现。

  3.以修饰后的基因组DNA为模板,分别用甲基化引物和非甲基化引物进行PCR扩增,可选用热启动酶或者采用降落PCR等方法提高PCR扩增的特异性。

  4.将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳以判断结果。

  结果分析语音在进行甲基化和非甲基化PCR扩增时,均设立空白对照和阳性对照。如果只扩增出非甲基化条带,判断为非甲基化;相反,如果只扩增出甲基化条带,则判断为甲基化;如果既能扩增出甲基化条带又能扩增出非甲基化条带,说明是半甲基化状态,在统计结果时也计为甲基化阳性。肿瘤细胞DNA总体甲基化的程度越低,癌症的恶性程度也就越大。

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